今日はナデシコさんにin situ教えてもらってました。
プローブ作って、標識付けて…明日は何するのか予習してません。

それよりも、金曜にo/nで仕掛けたプラスミドを土曜に切り出ししようとしたら！！
スター活性！！b(≧∇≦)ﾋｬｯﾎｳ

愕然とした。前回はちゃんとダブルダイジェッションで切れてたのに…酵素バッファーだって間違ってなかった。
たまたま来てたナデシコさんにすがる思いで聞いてみると、酵素がメチレーションを起こしているか、プラスミド量が多くて切れ残っているかではないか。と言われた。

酵素間違えたか？いや、間違ってなかった。バッファーか？いや、それも間違ってないって。
確かに、プラスミド量は多かったかもしれない。前回は5ugだったが、今回は計算の都合上6.0～6.5ugだった。でも、o/nで反応させてたら酵素が頑張ってくれるはずと期待していたのに～～～～～～

結局、週が明けて今朝中尾さんに助けを求めた。
酵素のメチレーションは起こらないメーカーで、泳動写真からやはり切れ残りと、スター活性と言われた。あとは、ダブルダイジェッションによるグリセロール濃度が上がって、阻害されたか。


結論として、酵素量とプラスミド量を減らし、反応量を倍にする。（グリセロール濃度対策）
これで、また失敗したら、ダブルダイジェッションを諦め途中でエタ沈を挟んで1つずつ酵素反応をすること。

いや～～～


反応の間に10日に採卵した卵から稚魚が出たので、蛍光顕微鏡で選別。
とりあえず、昨日のホモだヘテロだと悩んでいた系統とは違うので、光ってるのと、光ってないのを選別し、光ってる中でも部位別にさらに選別。
今回、この稚魚たちは固定されることなく全て飼育維持用として育てられる。

可愛い我子。前回は1匹しか生き残らなくて、そいつは水槽に1匹しかいないからエサを独り占めでスクスク育っている。小さな兄弟が増えたよ～
ふぅ。今日のエサ当番は誰かな？これから新年会が食堂であるんだよな～。


私じゃん！！！Σ(￣ロ￣lll)　ｶﾞﾋﾞｰﾝ

大変だ。新年会終わるまで待っててちょ～～～！
新年会は古巣岡田ラボのある建物のラボ達とである。微妙な気持ちで出席したんだけど、岡田先生は以外にも機嫌がよく、他のメンバーも私が髪を切ったことに驚いて話しかけてきたりしてくれた。
新年会を兼ねた親睦会みたいなものだから、私も積極的に振舞ってみた。
そこそこ嫌いだった人とは「久し振り」と言うことで会話が出来た。まぁマチャキがいなかったからよかったけどね！いたら、バリバリ仕事してることをアピールしてやりたかったね。


そして新年会も終わり、酵素反応を仕掛けて8時間経過…いきなり全量切り出しとして泳動するのは恐ろしいので、ちんまりチェック泳動することに。
20分後、泳動結果を見て崩れた。

切れてるぅ…

中尾さんに報告して、切り出しをして、次の作業は明日にした。
プラスミド量、酵素量、反応量とそれぞれの微妙な量の違いで上手くいかなかったんだと悟った。

魚にエサも与え、稚魚をシャーレから水槽に引越しさせて、はぁもうこんな時間。
皆新年会に出席したため、まだ仕事をしている。
先生に見つからないうちにそそくさと帰ることができましたとさ。

めでたしめでたし。